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細(xì)菌專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素

更新時(shí)間:2022-03-01點(diǎn)擊次數(shù):995

細(xì)菌專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

內(nèi)皮細(xì)胞分化G蛋白偶聯(lián)受體8抗體

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長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL5抗體

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烯醇化酶超家族成員1抗體

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內(nèi)皮細(xì)胞活化蛋白受體抗體

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胞吞調(diào)控蛋白Eps15抗體

真核翻譯起始因子4E抗體

核輸出蛋白5抗體

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睪酮調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和腫瘤抑制基因抗體

聚合酶延伸因子2抗體

聚合酶延伸因子抗體

神經(jīng)生長因子調(diào)控抑制蛋白抗體

內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體

紅細(xì)胞分化相關(guān)因子1抗體

微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體

內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體

雌激素受體β抗體


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